当前位置:首页 > 服务项目 > 翻译后修饰/二硫键/糖基化检测
   翻译后修饰/二硫键/糖基化检测

·蛋白质糖基化(protein glycosylation analysis)


  我们提供世界先进的糖基化分析技术,为世界上众多研究机构提供了蛋白质糖基化定性、定量 的分析,包括对于释放的 N-糖的定量分析,位点特异性 N 糖、O 糖分析,糖链分析等服务。


  1)在释放的 N-糖分析中,N-糖酶解后从蛋白质上释放,经荧光标记。糖链经过亲水色谱柱 (HILIC)分离,由荧光检测器和质谱仪同时进行检测。质谱数据可以提供对每个糖链的结构 进行的高灵敏度的定性捡测,而荧光检测则可以提供了每种糖链准确的定量信息。 

  2)特异性位点的 N-糖和 O-糖分析中,糖蛋白将由多种酶进行酶切,再由 NanoLC-MS/MS 进 行分析。我们开发了生物信息学软件,可以用来识别不同的 N-糖肽和 O-糖肽的特异性质谱图谱。在各个特异性糖基化位点的糖型也由我们的专业人员进行进一步确认。 

  3)糖链分析具体步骤如下:糖链从糖蛋白质上酶解下来,经荧光标记,再与不同的糖苷酶进 行逐步的反应,每步反应产物都经由亲水色谱分离,再由荧光检测仪和质谱仪进行检测。


·二硫键分析(disulfide bond analysis) 


    普泰针对蛋白质二硫键特征提供两类服务:①二硫键连接分析,②自由硫基的分析。


应用:

  1)新型蛋白质的未知二硫键 ;

  2)在大肠杆菌内表达复性的蛋白质的二硫键 ;

  3)治疗性蛋白质中的正确二硫键连接。


我们采用不同的方法分析常规二硫键,交叉重叠的二硫键以及错配的二硫键。 

  1)对于常规二硫键的确认是基于非还原性及还原性蛋白质的一级质谱、串联质谱的差异。通常我们会达到对含二硫键肽段3倍以上的覆盖来达到准确完整的分析。 

  2)对于交叉重叠的二硫键,我们开发了新的方法,通过逐步进行的半胱氨酸的还原和分步乙酰化反应对二硫键进行去偶联。 

  3)我们专有的软件可以检测一个蛋白质中所有可能的二硫键,包括少量的错配二硫键。


·蛋白质翻译后修饰 (post-translational modification)


  我们开发了全面分析蛋白质翻译后修饰的技术,分析范围包括蛋白质磷酸化,甲基化,乙酰 化,泛素化,类泛素化,以及其他几百种的蛋白质翻译后修饰,为科研领域,工业生产领域上 的众多客户提供蛋白质翻译后修饰分析服务。

  对于翻译后修饰的分析,我们开发了基于高灵敏度 NanoLC-MS/MS 的方法,该方法可以检测 到极低水平的翻译后修饰。我们开发的软件也可以分析任何已知的修饰。专业人员对于每种修饰进行进一步的确认。如有必要,我们还会在分析前采取一定的富集步骤去富集相应修饰的肽段或蛋白质分子。

    

如果您想进一步了解这个服务项目,请与我们联系