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技术 ( Technology)


   在释放的N-糖基分析中N糖经由N糖苷酶F(PNGase)酶解后从蛋白质上释放,在与唾液酸酶进行反应以去除唾液酸残基。处理后的N糖与荧光标记化合物2-氨基嘧啶反应。带标记的糖链经过液相的亲水色谱柱(HILIC)分离,由荧光检测器检测,同时也由耦联的串联质谱仪进行检测。一级和串联质谱可以提供对每个糖链的结构进行的高灵敏度的定性捡测,而液相色谱的荧光检测则可以提供了每种糖链准确的定量信息。

   特异性位点的N-糖和O-糖分析中,糖蛋白质将由多种酶进行酶切,得到的含糖链肽段将由NanoLC-MS/MS进行分析。我们开发了生物信息学软件,可以用来识别不同的N-糖肽和O-糖肽的特异性质谱图谱。在各个特异性糖基化位点的糖型也由我们的专业人员进行进一步确认。

   糖链分析具体步骤如下:首先由N-糖苷酶F将糖链从糖蛋白质上酶解下来,然后用荧光标记2-氨基嘧啶标记糖链。标记后的糖链与不同的糖苷酶进行逐步的反应,每步反应产物都经由亲水色谱分离,再由荧光检测仪和耦连的质谱仪进行检测。

    对于翻译后修饰的分析,我们开发了基于高灵敏度NanoLC-MS/MS的方法,该方法可以检测到极低水平的翻译后修饰。我们开发的PTMmap软件也可以分析任何已知的修饰。在报告给客户之前,我们还有专业人员对于每种修饰进行进一步的确认。如有必要,我们还会在分析前采取一些富集的步骤去富集含有所需修饰的肽段或蛋白质分子。