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二硫键检测和游离巯基测定 (Disulfide Bond Analysis)


    正确的二硫键对于一个蛋白质的正确折叠以及生物功能都至关重要。 普泰提供针对蛋白质二硫键特征两类服务:二硫键连接分析用于确认一个蛋白质中二硫键的数目和位点;而自由硫基的分析则是通过色度检测来确认一个蛋白质样品中所有自由硫基的比例。基于我们开发的世界先进的蛋白质质二硫键分析技术,我们可以分析复杂的二硫键连接,例如像交叉重叠的二硫键以及复杂的错配二硫键。

应用:

分析新型蛋白质的未知二硫键

分析在大肠杆菌内表达复性的蛋白质的二硫键

确认治疗性蛋白质中的正确二硫键连接

 

技术:

1)对于二硫键分析,我们针对正常二硫键,交叉重叠的二硫键以及错配的二硫键都开发了不同的方法。

2)对于常规二硫键的确认是基于非还原性及还原性蛋白质的一级质谱、串联质谱的差异。通常我们会达到对含二硫键肽段3倍以上的覆盖来达到准确完整的分析。

3)对于交叉重叠的二硫键,我们开发了新的方法,通过逐步进行的半胱氨酸的还原和分步乙酰化反应对重叠在一起的两个及更多的二硫键进行去偶联。

4)我们专有的S2Map软件可以检测一个蛋白质中所有可能的二硫键,包括少量的错配的二硫键。这些分析通常对于有多年经验的专业人员往往都是极其困难和耗时的工作。


    蛋白质自由硫基的检测是以Ellman检测为基础。在这个检测中,蛋白质待测样品与一系列已知浓度的标准品L-半胱氨酸同时与化合物DTNB反应,紫外-可见光分度光度仪将对产物在412nm处的吸收峰进行测量。这样参照根据标准品得到的标准曲线,我们就可以为确认蛋白质样品中自由硫基水平。


样品要求:通常的二硫键检测,我们需要高于80%纯度的蛋白质20ug-100ug。如果检测集中分布的二硫键和错配二硫键,我们需要更多的样品量。蛋白质自由硫基检测通常需要500ug的蛋白质量。


周期:平均2-5周,具体取决于项目难度。


价格:二硫键检测项目的价格取决于蛋白质的大小、二硫键数目和形态,序列特征、纯度以及样品量,因为我们需要这些信息以便对每个样品制定优化的处理步骤。请给我们发送以上样品信息,我们会在12个小时内给予正式报价。如果您在发送样品信息前需要我们签署保密协议,也请与我们联系